L’ibridazione fluorescente in situ (FISH) è una delle numerose tecniche utilizzate per analizzare il DNA delle cellule, alla ricerca della presenza o dell’assenza di geni specifici o di porzioni di geni.
Molti tipi diversi di cancro sono associati a note anomalie genetiche. E con genetica non intendiamo solo ereditarietà. Nel corso della vita, le cellule possono commettere errori quando si dividono e crescono. Le mutazioni nel DNA associate al cancro possono accumularsi in queste cellule.
Indice
Come funziona
FISH è una tecnica che utilizza sonde fluorescenti per rilevare geni specifici o parti di geni (sequenze di DNA). Il personale di laboratorio dei centri medici e gli oncologi utilizzano FISH per aiutare a valutare i pazienti che potrebbero avere il cancro e talvolta per monitorare un paziente che è già stato diagnosticato con il cancro e curato.
La FISH può essere eseguita utilizzando vari tipi di campioni a seconda della posizione e del tipo di cancro sospettato: cellule tumorali ottenute dal sangue periferico, da una biopsia del midollo osseo o da una biopsia del linfonodo e tessuto fissato in formalina e incluso in paraffina (si tratta di un campione di tessuto che viene elaborato in laboratorio e incluso in un tipo di cera, rendendolo più rigido, in modo che possa essere tagliato in sezioni sottili e montato per l’osservazione al microscopio).
Cosa significano le lettere
La “H” in FISH si riferisce all’ibridazione. Nell’ibridazione molecolare, una sequenza di DNA o RNA marcata viene utilizzata come sonda: immagina un mattoncino Lego rosso, se vuoi. La sonda viene utilizzata per trovare un mattoncino Lego equivalente, o una sequenza di DNA, in un campione biologico.
Il DNA nel tuo campione è come pile di mattoncini Lego, e la maggior parte dei mattoncini in queste pile non corrisponderà alla nostra sonda rossa. E tutti i tuoi mattoncini sono ordinatamente organizzati in 23 coppie di pile di mattoncini: ogni pila è uno dei tuoi cromosomi omologhi accoppiati, più o meno. A differenza dei mattoncini Lego, la nostra sonda Lego rossa è come una potente calamita e trova la sua corrispondenza senza dover selezionare le pile.
La “F” si riferisce alla fluorescenza. La nostra sonda rossa potrebbe perdersi tra le pile di mattoni, quindi è etichettata con un colorante fluorescente colorato in modo che brilli. Quando trova la sua corrispondenza tra le 23 pile accoppiate, un’etichetta fluorescente ne rivela la posizione. Quindi, ora puoi vedere come ricercatori e clinici potrebbero usare la FISH per aiutare a identificare dove (quale pila o quale cromosoma) si trova un particolare gene per un dato individuo.
La “I” e la “S” stanno per in situ . Ciò si riferisce al fatto che il nostro mattoncino Lego rosso sta cercando la sua corrispondenza all’interno del campione che hai fornito .
FISH e tumori specifici del sangue
La FISH e altre procedure di ibridazione in situ vengono utilizzate per diagnosticare una varietà di anomalie cromosomiche, ovvero cambiamenti nel materiale genetico, cambiamenti nei cromosomi, tra cui:
- Delezione: una parte di un cromosoma è scomparsa
- Traslocazione: una parte di un cromosoma si stacca e si attacca a un altro cromosoma
- Inversione: una parte di un cromosoma si stacca e si reinserisce, ma in ordine inverso
- Duplicazione: una parte di un cromosoma è presente in troppe copie all’interno della cellula
Ogni tipo di cancro può avere il suo set di cambiamenti cromosomici e sonde rilevanti. La FISH non solo aiuta a identificare i cambiamenti genetici iniziali in un processo patologico come il cancro, ma può anche essere utilizzata per monitorare la risposta alla terapia e la remissione della malattia.
I cambiamenti genetici rilevati dalla FISH a volte offrono informazioni aggiuntive su come è probabile che si comporti il cancro di un individuo, in base a quanto osservato in passato in persone con lo stesso tipo di cancro e cambiamenti genetici simili. A volte la FISH viene utilizzata dopo che la diagnosi è già stata fatta, per raccogliere informazioni aggiuntive che potrebbero aiutare a prevedere l’esito di un paziente o il miglior trattamento.
La FISH può identificare anomalie cromosomiche nelle leucemie , inclusa la leucemia linfatica cronica (LLC). Per la leucemia linfatica cronica/linfoma linfocitico piccolo, la FISH consente ai pazienti di scoprire la loro categoria prognostica: buona, intermedia o scarsa. Nella leucemia linfoblastica acuta (ALL), la genetica delle cellule leucemiche può fornirti informazioni sul livello di rischio di cancro e aiutare a guidare le decisioni terapeutiche.
I pannelli FISH sono disponibili anche per il linfoma, il mieloma multiplo, i disturbi proliferativi delle plasmacellule e la sindrome mielodisplastica. Nel caso del linfoma a cellule del mantello, ad esempio, esiste una traslocazione che la FISH può rilevare chiamata GH/CCND1 t (11;14) che è frequentemente associata a questo linfoma.
Perché FISH?
Un vantaggio della FISH è che non deve essere eseguita su cellule che si stanno dividendo attivamente. I test citogenetici di solito durano circa tre settimane, perché le cellule cancerose devono crescere in piastre di laboratorio per circa 2 settimane prima di poter essere testate. Al contrario, i risultati della FISH sono solitamente disponibili dal laboratorio entro pochi giorni.