Hybrydyzacja fluorescencyjna in situ (FISH) jest jedną z kilku technik wykorzystywanych do przeszukiwania DNA komórek w celu wykrycia obecności lub braku określonych genów lub części genów.
Wiele różnych typów raka jest związanych ze znanymi nieprawidłowościami genetycznymi. A przez genetykę nie mamy na myśli tylko dziedziczności. Przez całe życie komórki mogą popełniać błędy podczas podziału i wzrostu. Mutacje w DNA, które są związane z rakiem, mogą gromadzić się w tych komórkach.
Spis treści
Jak to działa
FISH to technika wykorzystująca sondy fluorescencyjne do wykrywania określonych genów lub części genów (sekwencji DNA). Personel laboratorium medycznego i onkolodzy wykorzystują FISH, aby pomóc ocenić pacjentów, którzy mogą mieć raka, a czasami monitorować pacjenta, u którego zdiagnozowano już raka i który jest leczony.
Badanie FISH można wykonać z użyciem różnych rodzajów próbek, w zależności od lokalizacji i podejrzewanego rodzaju nowotworu: Komórki nowotworowe pobrane z krwi obwodowej, z biopsji szpiku kostnego lub z biopsji węzłów chłonnych oraz utrwalona formaliną i zatopiona w parafinie tkanka (chodzi o próbkę tkanki, która jest przetwarzana w laboratorium i zatapiana w rodzaju wosku, co czyni ją bardziej sztywną, dzięki czemu można ją pokroić na cienkie plasterki i zamontować do oglądania pod mikroskopem).
Co oznaczają litery
Litera „H” w FISH odnosi się do hybrydyzacji. W hybrydyzacji molekularnej znakowana sekwencja DNA lub RNA jest używana jako sonda — wyobraź sobie czerwony klocek Lego, jeśli wolisz. Sonda jest używana do znalezienia odpowiednika klocka Lego lub sekwencji DNA w próbce biologicznej.
DNA w twoim okazie jest jak stosy klocków Lego, a większość klocków w tych stosach nie pasuje do naszej czerwonej sondy. A wszystkie twoje klocki są schludnie zorganizowane w 23 pary stosów klocków — każdy stos to mniej więcej jeden z twoich sparowanych homologicznych chromosomów. W przeciwieństwie do klocków Lego, nasza czerwona sonda Lego jest jak silny magnes i znajduje swoje dopasowanie bez konieczności sortowania stosów.
„F” odnosi się do fluorescencji. Nasza czerwona sonda może zgubić się w stosach cegieł, więc jest oznaczana kolorowym barwnikiem fluorescencyjnym, aby świeciła. Gdy znajdzie swój odpowiednik wśród 23 sparowanych stosów, znacznik fluorescencyjny ujawnia jego lokalizację. Teraz możesz więc zobaczyć, jak naukowcy i klinicyści mogą używać FISH, aby pomóc zidentyfikować, gdzie (w którym stosie lub w którym chromosomie) znajduje się konkretny gen dla danej osoby.
„I” i „S” oznaczają in situ . Odnosi się to do faktu, że nasz czerwony klocek Lego szuka swojego odpowiednika w próbce, którą podałeś .
FISH i specyficzne nowotwory krwi
Procedury hybrydyzacji FISH i inne procedury hybrydyzacji in situ służą do diagnozowania różnych nieprawidłowości chromosomowych — zmian w materiale genetycznym, zmian w chromosomach, w tym:
- Usunięcie: część chromosomu zniknęła
- Translokacja: część jednego chromosomu odrywa się i przykleja do innego chromosomu
- Inwersja: część chromosomu odrywa się i zostaje ponownie wstawiona, ale w odwrotnej kolejności
- Duplikacja: część chromosomu występuje w zbyt wielu kopiach w komórce
Każdy rodzaj nowotworu może mieć własny zestaw zmian chromosomalnych i odpowiednich sond. FISH nie tylko pomaga zidentyfikować początkowe zmiany genetyczne w procesie chorobowym, takim jak rak, ale może być również używany do monitorowania odpowiedzi na terapię i remisji choroby.
Zmiany genetyczne wykryte przez FISH czasami dostarczają dodatkowych informacji o tym, jak rak danej osoby prawdopodobnie będzie się zachowywał, w oparciu o to, co zaobserwowano w przeszłości u osób z tym samym rodzajem raka i podobnymi zmianami genetycznymi. Czasami FISH jest stosowany po postawieniu diagnozy, aby uzyskać dodatkowe informacje, które mogą pomóc przewidzieć wynik leczenia pacjenta lub najlepsze leczenie.
FISH może identyfikować nieprawidłowości chromosomalne w białaczkach , w tym w przewlekłej białaczce limfocytowej (CLL). W przypadku przewlekłej białaczki limfocytowej/chłoniaka małych limfocytów FISH pozwala pacjentom dowiedzieć się, jaka jest ich kategoria prognostyczna: dobra, pośrednia lub zła. W ostrej białaczce limfoblastycznej (ALL) genetyka komórek białaczkowych może powiedzieć Ci o poziomie ryzyka raka i pomóc w podejmowaniu decyzji terapeutycznych.
Panele FISH są również dostępne w przypadku chłoniaka, szpiczaka mnogiego, zaburzeń proliferacji komórek plazmatycznych i zespołu mielodysplastycznego. Na przykład w przypadku chłoniaka płaszcza istnieje translokacja , którą można wykryć za pomocą FISH, zwana GH/CCND1 t (11;14), która często jest związana z tym chłoniakiem.
Dlaczego FISH?
Zaletą FISH jest to, że nie musi być przeprowadzana na komórkach, które aktywnie się dzielą. Testy cytogenetyczne zwykle trwają około trzech tygodni, ponieważ komórki nowotworowe muszą rosnąć w naczyniach laboratoryjnych przez około 2 tygodnie, zanim będzie można je przetestować. Natomiast wyniki FISH są zazwyczaj dostępne w laboratorium w ciągu kilku dni.